Χρωματογραφία μεμβράνης ανταλλαγής κατιόντων SP Strong

Εισαγωγή στα προϊόντα χρωματογραφίας μεμβράνης ανταλλαγής CM Weak Ion-

 

1. Επισκόπηση

Η χρωματογραφία ανταλλαγής ασθενούς κατιόντος-CM είναι μια τεχνολογία καθαρισμού στην οποία οι ομάδες καρβοξυμεθυλίου συνδέονται στη μεμβράνη για να σχηματίσουν μια λειτουργική μονάδα. Ο διαχωρισμός επιτυγχάνεται με βάση τις διαφορές στις ιδιότητες φορτίου και τις πυκνότητες φορτίου διαφόρων βιομορίων. Δεδομένου ότι τα περισσότερα βιολογικά μακρομόρια περιέχουν ομάδες καρβοξυλίου ή υδροξυλίου, τα χαρακτηριστικά φορτίου και το μέγεθός τους μπορούν να ρυθμιστούν αλλάζοντας την τιμή pH του ρυθμιστικού διαλύματος. Αφού τα βιομόρια δεσμευτούν στη μονάδα μεμβράνης που φέρει αντίθετα φορτία, η έκλουση πραγματοποιείται αλλάζοντας την ιοντική ισχύ ή το pH της κινητής φάσης. Τα μόρια με ασθενέστερη συγγένεια δέσμευσης εκλούονται πρώτα, ενώ εκείνα με ισχυρότερη συγγένεια δέσμευσης εκλούονται αργότερα, επιτυγχάνοντας έτσι αποτελεσματικό διαχωρισμό.

 

2. Πλεονεκτήματα προϊόντος

2.1 Γρήγορη και αποτελεσματική: Η υψηλή ικανότητα σύνδεσης μπορεί να επιτευχθεί με ρυθμούς ροής έως και 40 φορές ταχύτερους από τη συμβατική χρωματογραφία-με βάση τη ρητίνη. Σε σύγκριση με την παραδοσιακή χρωματογραφία συσκευασμένης-κλίνης, η χρωματογραφία μεμβράνης μπορεί να συντομεύσει τον χρόνο διεργασίας κατά 30–40 φορές. Ο τυπικός ρυθμός ροής λειτουργίας είναι 10 MV/min.

2.2 Υψηλή αποτελεσματικότητα δέσμευσης: Η χρωματογραφία μεμβράνης δείχνει υψηλή ικανότητα φόρτωσης και υψηλούς ρυθμούς ροής υπό συνθήκες χαμηλής πτώσης πίεσης, επιτρέποντας τη σύλληψη φορτισμένων βιομορίων με ένα μόνο πέρασμα μέσα από τη μονάδα.

2.3 Επεκτάσιμο και ευέλικτο: Η πλήρης σειρά προϊόντων χρωματογραφίας μεμβράνης μπορεί να καλύψει διαφορετικές ανάγκες επεξεργασίας βιομακρομορίων, καλύπτοντας στάδια από την ανάπτυξη της διαδικασίας έως την κατασκευή-μεγάλης κλίμακας. Ο σχεδιασμός της κάψουλας επιτρέπει εφαρμογές μίας-χρήσης ή μπορεί να καθαριστεί και να επαναχρησιμοποιηθεί όπως απαιτείται.

2.4 Αυξημένη παραγωγικότητα: Ο συμπαγής σχεδιασμός ελαχιστοποιεί το αποτύπωμα της εγκατάστασης. Με την εξάλειψη των βημάτων πλήρωσης στηλών, καθαρισμού, επικύρωσης καθαρισμού και αποθήκευσης στηλών, η επεξεργασία μπορεί να ξεκινήσει μετά την εξισορρόπηση με σχετικά μικρό όγκο προσωρινής αποθήκευσης. Χωρίς την ανάγκη συσκευασίας στηλών, καθαρισμού ή αποθήκευσης, το κόστος εργασίας μπορεί να μειωθεί έως και περισσότερο από 50%.

 

3 Τεχνικές Παράμετροι

3.1 Δομικά υλικά

	Εργαστηριακή κλίμακα	μικρής κλίμακας	Πιλοτική κλίμακα	Κλίμακα παραγωγής
Όγκος μεμβράνης	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Δομή στήριξης μεμβράνης	Πολυπροπυλένιο
Περίβλημα μεμβράνης	Πολυπροπυλένιο
O δαχτυλίδι	Καουτσούκ σιλικόνης

3.2 Λειτουργικά Χαρακτηριστικά

	Εργαστηριακή κλίμακα	μικρή- κλίμακα	Κλίμακα πιλότου-	Κλίμακα παραγωγής
Όγκος μεμβράνης	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Συνιστώμενος ρυθμός ροής	1-6 ml/λεπτό	25-150 ml/λεπτό	2-12L/λεπτό	25-150 λίτρα/λεπτό
Μέγιστη θερμοκρασία λειτουργίας	35 μοίρες
Μέγιστη πίεση λειτουργίας	3 bar (25 μοίρες)
Μέγιστη διαφορά πίεσης	3 bar (25 μοίρες)
Συνθήκες αποθήκευσης	Υδατικό διάλυμα αιθανόλης 20%.

Σε σύγκριση με τα συμβατικά μέσα, η διάρκεια ζωής της χρωματογραφίας μεμβράνης CM είναι συγκρίσιμη με εκείνη της γέλης αγαρόζης CM 6FF.

Εικόνα 1. Αλλαγές στην ικανότητα φόρτωσης της χρωματογραφίας μεμβράνης CM μετά από πολλαπλές χρήσεις στη δοκιμή λυσοζύμης.

Επιπλέον, αξιολογήσαμε την αποτελεσματικότητα απομάκρυνσης των πρωτεϊνών του κυττάρου ξενιστή και των νουκλεϊκών οξέων με χρωματογραφία μεμβράνης. Τα αποτελέσματα φαίνονται παρακάτω.

Πίνακας 1. Ρυθμοί απομάκρυνσης του DNA και των πρωτεϊνών του κυττάρου ξενιστή σε CHO-εκφρασμένο υλικό IgG χρησιμοποιώντας χρωματογραφία μεμβράνης CM

Μια σειρά πειραμάτων απέδειξε ότι η χρωματογραφία μεμβράνης CM μπορεί να αφαιρέσει αποτελεσματικά τους ρύπους διατηρώντας παράλληλα υψηλό ποσοστό ανάκτησης του στόχου IgG

	DNA				HCP
	Ανάκτηση IgG	Περιεκτικότητα (pg/mg IgG) με RT PCR		Συντελεστής Αφαίρεσης	Περιεχόμενο (ng/mg IgG) από την Elisa		Συντελεστής Αφαίρεσης
Τρέξιμο	%	Πριν από τη μεμβράνη Q	Μετά τη μεμβράνη Q	Κούτσουρο	Πριν από τη μεμβράνη Q	Μετά τη μεμβράνη Q	Κούτσουρο
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Χρησιμοποιώντας τη χρωματογραφία μεμβράνης Gudiling CM σε σύγκριση με άλλες μάρκες, τα δεδομένα ικανότητας φόρτωσης φαίνονται παρακάτω.

Ικανότητα φόρτωσης (mg/mL)	Jingbiao 1	Καθοδήγηση
Λυσοζύμη	18	23
Τρυψίνη	17	20

Πίνακας 2. Απόδοση φόρτωσης διαφορετικών πρωτεϊνών στο προϊόν μας σε σύγκριση με ανταγωνιστικά προϊόντα

Η συνολική αξιολόγηση δείχνει ότι η ικανότητα φόρτωσης είναι συγκρίσιμη με αυτή των εισαγόμενων προϊόντων.

Σχήμα 2. Δοκιμή ικανότητας φόρτωσης της μονάδας χρωματογραφίας μεμβράνης CM χρησιμοποιώντας λυσοζύμη ως τυπική πρωτεΐνη.

Η δυναμική ικανότητα φόρτωσης συγκρίθηκε επίσης με αυτή των εισαγόμενων προϊόντων. Η επαλήθευση έδειξε ότι η λυσοζύμη μπορούσε να εκλουσθεί χρησιμοποιώντας 160 mM NaCl, το οποίο επιτρέπει την αποτελεσματική σύλληψη των περισσότερων πρωτεϊνών-στόχων.

Μέσω της βελτιστοποίησης διαφορετικών συνθηκών έκλουσης, διαπιστώσαμε ότι η χρωματογραφία μεμβράνης παρουσιάζει συμπεριφορά έκλουσης παρόμοια με τη χρωματογραφία γέλης αγαρόζης, όπου η καθαρότητα πρωτεΐνης ποικίλλει σημαντικά κάτω από διαφορετικές συγκεντρώσεις άλατος. Στην πρακτική Ε&Α και παραγωγή, είναι απαραίτητος ο ποσοτικός προσδιορισμός των συνθηκών έκλουσης ισορροπίας για να ληφθεί πρωτεΐνη-στόχος υψηλής{1}καθαρότητας.

 

4. Τυπικές περιπτώσεις εφαρμογής

• Αφαίρεση DNA, ιών και πρωτεϊνών του κυττάρου ξενιστή
• Σύλληψη πλασμιδίων, ιών και πρωτεϊνών, καθώς και καθαρισμός ολιγονουκλεοτιδίων
• Αποχρωματισμός ζωμού ζύμωσης μαγιάς και δέσμευση πρωτεΐνης υψηλής{{0} χωρητικότητας

 

5. Λειτουργική διαδικασία / Ροή εργασιών

5.1: Προετοιμασία και συναρμολόγηση εξοπλισμού:

5.1.1: Εγκαταστήστε τη μονάδα χρωματογραφίας μεμβράνης σε σύστημα χρωματογραφίας AKTA. βεβαιωθείτε ότι η κατεύθυνση ροής ακολουθεί το βέλος που σημειώνεται στη μονάδα. Η μονάδα μπορεί να συνδεθεί χρησιμοποιώντας συνδέσμους Luer ή συνδετήρες σφιγκτήρα.

5.1.2 Ρυθμίστε τον ρυθμό ροής εισόδου στα 5–10 MV/min και χρησιμοποιήστε buffer εξισορρόπησης για να καθαρίσετε τον αέρα από τη μονάδα. Συνεχίστε το ξέπλυμα μέχρι να μην παρατηρηθούν φυσαλίδες στην έξοδο και μετά συνδέστε την έξοδο του διηθήματος στο σύστημα χρωματογραφίας.

5.2.:Προ-προετοιμασία

5.2.1: Ρυθμίστε τον ρυθμό ροής εισόδου στα 5–10 MV/min και εκτελέστε προεπεξεργασία χρησιμοποιώντας 0,5 M NaOH για περισσότερα από 5 MV για να εξασφαλίσετε ότι η μεμβράνη θα φτάσει σε ισορροπία.

5.2.2: Κάτω από τις ίδιες συνθήκες παροχής, πραγματοποιήστε προ-επεξεργασία με 1 M NaCl για περισσότερα από 5 MV για να διασφαλίσετε ότι η μεμβράνη θα φτάσει σε ισορροπία.

5.3. Διαδικασία χρωματογραφίας

5.3.1 Ρυθμίστε τον ρυθμό ροής εισόδου σε 5–10 MV/min και εκτελέστε προεπεξεργασία με ρυθμιστικό διάλυμα εξισορρόπησης για περισσότερα από 5 MV έως ότου η μεμβράνη φτάσει σε ισορροπία.

5.3.2 Μετά από 0,22 μm προ-διήθησης, φορτώστε το δείγμα στη στήλη και συνεχίστε μέχρι να εφαρμοστεί ολόκληρο το δείγμα ή να επιτευχθεί η ικανότητα φόρτωσης της χρωματογραφίας.

5.3.3 Πλύσιμο με ρυθμιστικό διάλυμα εξισορρόπησης για περισσότερα από 10 MV έως ότου η τιμή UV μειωθεί στη βασική γραμμή.

5.3.4 Σύμφωνα με το σχεδιασμό της διαδικασίας, εφαρμόστε έκλουση βαθμίδωσης ή γραμμικό σύστημα έκλουσης και συλλέξτε τα κλάσματα σε τμήματα όπως απαιτείται.

5.4 CIP Post-θεραπεία χρήσης – CIP (Clean-in-Place) για σύστημα χρωματογραφίας μεμβράνης.

5.4.1 Ρυθμίστε το ρυθμό ροής εισόδου σε 5–10 MV/min και επεξεργαστείτε με 1 M NaOH για περισσότερα από 10 MV έως ότου η τιμή UV πέσει κάτω από τη βασική γραμμή.

5.4.2 Μετά από 30 λεπτά πλύσης σε κυκλοφορία, ξεπλύνετε με νερό μέχρι το pH να είναι μεταξύ 7 και 8, μετά αλλάξτε σε αιθανόλη 20% και συνεχίστε τον καθαρισμό μέχρι η αγωγιμότητα να παραμείνει σχεδόν αμετάβλητη.

5.5 Αποθήκευση χρωματογραφίας μεμβράνης

Μετά τη χρήση και την ολοκλήρωση του CIP, η μονάδα μεμβράνης μπορεί να αφαιρεθεί και να αποθηκευτεί με εμβάπτιση σε αιθανόλη 20% ή να αποθηκευτεί online σε θερμοκρασία δωματίου σε διάλυμα που περιέχει 20% αιθανόλη. Το διάλυμα αιθανόλης 20% θα πρέπει να ελέγχεται και να αντικαθίσταται τακτικά.

 

6, Πληροφορίες παραγγελίας

Φίλτρο κάψουλας χρωματογραφίας μεμβράνης ανταλλαγής κατιόντων ασθενούς τύπου CM-

	Εργαστηριακή κλίμακα	Μικρής κλίμακας	Πιλοτική κλίμακα	Κλίμακα παραγωγής
Μοντέλο	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Περιοχή μεμβράνης	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Δημοφιλείς Ετικέτες: sp χρωματογραφία μεμβράνης ισχυρής ανταλλαγής κατιόντων, Κίνα, προμηθευτές, κατασκευαστές, εργοστάσιο, χονδρική, χύμα, σε απόθεμα, δωρεάν δείγμα