Χρωματογραφία μεμβράνης ανταλλαγής ασθενούς ανιόντος DEAE

DEAE Weak Anion Exchange Membrane Chromatography – Εισαγωγή προϊόντος

 

1. Επισκόπηση

Η χρωματογραφία ανταλλαγής ασθενούς ανιόντος DEAE είναι μια τεχνική καθαρισμού που βασίζεται σε διαφορές στις ιδιότητες φορτίου και στην πυκνότητα φορτίου διαφόρων βιομορίων. Δεδομένου ότι τα περισσότερα βιομακρομόρια περιέχουν λειτουργικές ομάδες όπως καρβοξυλικές ή υδροξυλικές ομάδες, τα χαρακτηριστικά φορτίου και το μέγεθός τους μπορούν να ρυθμιστούν τροποποιώντας το pH του ρυθμιστικού διαλύματος. Αφού συνδεθούν τα βιομόρια σε ένα αντίθετα φορτισμένο μέσο ανταλλαγής ανιόντων ή κατιόντων, ο διαχωρισμός επιτυγχάνεται αλλάζοντας την ιοντική ισχύ ή το pH της κινητής φάσης. Τα μόρια με ασθενέστερη συγγένεια δέσμευσης εκλούονται πρώτα, ακολουθούμενα από εκείνα με ισχυρότερη συγγένεια δέσμευσης, επιτυγχάνοντας έτσι αποτελεσματικό διαχωρισμό

 

2. Πλεονεκτήματα προϊόντος

2.1 Υψηλή απόδοση: Επιτυγχάνει ισχυρή δέσμευση σε ρυθμούς ροής έως και 40 φορές υψηλότερους από τη χρωματογραφία βάσει ρητίνης-. Σε σύγκριση με την παραδοσιακή χρωματογραφία συσκευασμένης-κλίνης, η χρωματογραφία μεμβράνης συντομεύει τον συνολικό χρόνο διεργασίας κατά περίπου 30-40 φορές.

2.2 Υψηλή αποτελεσματικότητα δέσμευσης: Η χρωματογραφία μεμβράνης παρουσιάζει υψηλή ικανότητα σύνδεσης και υψηλό ρυθμό ροής υπό χαμηλή πτώση πίεσης, επιτρέποντας στα φορτισμένα βιομόρια να συλλαμβάνονται με ένα μόνο πέρασμα μέσα από τη στήλη.

2.3 Επεκτάσιμο και ευέλικτο: Η πλήρης σειρά προϊόντων χρωματογραφίας μεμβράνης μπορεί να καλύψει διάφορες ανάγκες καθαρισμού βιομακρομορίων, καλύπτοντας όλα τα στάδια από την ανάπτυξη της διαδικασίας έως την παραγωγή-μεγάλης κλίμακας. Ο δομικός σχεδιασμός-τύπου κάψουλας υποστηρίζει τόσο τη λειτουργία μίας-χρήσης όσο και την επαναχρησιμοποίηση μετά τον καθαρισμό.

2.4 Βελτιωμένη παραγωγικότητα: Ο συμπαγής σχεδιασμός ελαχιστοποιεί το αποτύπωμα της εγκατάστασης. Με την εξάλειψη των διαδικασιών συσκευασίας στηλών, καθαρισμού, επικύρωσης καθαρισμού και αποθήκευσης στηλών, το σύστημα μπορεί να λειτουργήσει απευθείας μετά την εξισορρόπηση του buffer χωρίς πλήρωση στηλών ή αποθήκευση. Το κόστος εργασίας μπορεί να μειωθεί έως και 50%.

 

3. Τεχνικές Παράμετροι

3.1 Δομικά Υλικά

	εργαστηριακή κλίμακα	μικρής κλίμακας	πιλοτική κλίμακα	κλίμακα παραγωγής
Όγκος μεμβράνης	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Δομή στήριξης μεμβράνης	Πολυπροπυλένιο (PP)
Περίβλημα μεμβράνης	Πολυπροπυλένιο (PP)
O δαχτυλίδι	Σιλικόνη

3.2 Χαρακτηριστικά λειτουργίας

	εργαστηριακή κλίμακα	μικρής κλίμακας	πιλοτική κλίμακα	Κλίμακα παραγωγής
Όγκος μεμβράνης	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Συνιστώμενος ρυθμός ροής	1-6 ml/λεπτό	25-150 ml/λεπτό	2-12 λίτρα/λεπτό	25-150 λίτρα/λεπτό
Μέγιστη θερμοκρασία λειτουργίας	35 μοίρες
Μέγιστη πίεση λειτουργίας	3 bar (25 μοίρες)
Μέγιστη διαφορική πίεση	3 bar (25 μοίρες)
Συνθήκες αποθήκευσης	20% 乙醇水溶液 20% υδατικό διάλυμα αιθανόλης

Εικόνα 1. Αλλαγές στην ικανότητα φόρτωσης χρωματογραφίας μεμβράνης μετά από πολλαπλές χρήσεις που παρακολουθούνται με BSA.

Επιπλέον, αξιολογήσαμε την αποτελεσματικότητα απομάκρυνσης των πρωτεϊνών του κυττάρου ξενιστή και των νουκλεϊκών οξέων χρησιμοποιώντας χρωματογραφία μεμβράνης DEAE. Τα αποτελέσματα είναι τα εξής.

	DNA				HCP
	Ανάκτηση IgG	Περιεκτικότητα (pg/mg IgG) με RT PCR		Συντελεστής Αφαίρεσης	Περιεχόμενο (ng/mg IgG) από την Elisa		Συντελεστής Αφαίρεσης
Τρέξιμο	%	Πριν τη μεμβράνη ΔΕΑΕ	Μετά μεμβράνης ΔΕΑΕ	Κούτσουρο	Πριν τη μεμβράνη ΔΕΑΕ	Μετά μεμβράνης ΔΕΑΕ	Κούτσουρο
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Πίνακας 1. Ρυθμοί απομάκρυνσης DNA και πρωτεϊνών κυττάρου ξενιστή από CHO-που εξέφρασε IgG χρησιμοποιώντας χρωματογραφία μεμβράνης DEAE.

Μια σειρά πειραμάτων απέδειξε ότι η χρωματογραφία μεμβράνης Q μπορεί να αφαιρέσει αποτελεσματικά τις ακαθαρσίες, διατηρώντας παράλληλα υψηλό ρυθμό ανάκτησης του στόχου IgG.

Επιπλέον, συγκρίναμε τη χρωματογραφία μεμβράνης Gudiling με εισαγόμενες μάρκες και τα δεδομένα ικανότητας φόρτωσης είναι τα εξής.

Εικόνα 2. Απόδοση φόρτωσης διαφορετικών πρωτεϊνών στη χρωματογραφία μεμβράνης και στα ανταγωνιστικά προϊόντα μας

Η συνολική αξιολόγηση δείχνει ότι η ικανότητα φόρτωσης είναι συγκρίσιμη με αυτή των εισαγόμενων προϊόντων.

Εικόνα 3. Απόδοση της μονάδας χρωματογραφίας μεμβράνης DEAE στη δοκιμή πρωτεΐνης κολλαγόνου

Χρησιμοποιώντας τη μονάδα χρωματογραφίας μεμβράνης DEAE, τα αποτελέσματα επικύρωσης έδειξαν ότι οι περισσότερες πρωτεΐνες κολλαγόνου στόχου μπορούσαν να συλληφθούν και να εκλουστούν χρησιμοποιώντας 135 mM NaCl.

Μέσω δοκιμών υπό διαφορετικές συνθήκες έκλουσης, διαπιστώσαμε ότι η χρωματογραφία μεμβράνης και η χρωματογραφία γέλης αγαρόζης παρουσιάζουν παρόμοια συμπεριφορά έκλουσης, όπου η καθαρότητα πρωτεΐνης ποικίλλει σημαντικά κάτω από διαφορετικές συγκεντρώσεις άλατος. Στην πρακτική Ε&Α και παραγωγή, είναι απαραίτητος ο ποσοτικός προσδιορισμός των βέλτιστων συνθηκών έκλουσης ισορροπίας για τη λήψη πρωτεϊνών-στόχων υψηλής{1}καθαρότητας.

 

4. Κλασικές θήκες εφαρμογής

Αφαίρεση DNA, ιών, πρωτεϊνών κυττάρων ξενιστή και ενδοτοξινών

Σύλληψη πλασμιδίων, ιών, νουκλεϊκών οξέων και πρωτεϊνών, καθώς και καθαρισμός ολιγονουκλεοτιδίων

 

5. Λειτουργική ροή εργασιών

5.1: Προετοιμασία και συναρμολόγηση εξοπλισμού

5.1.1 Η μονάδα χρωματογραφίας μεμβράνης πρέπει να εγκατασταθεί στο σύστημα χρωματογραφίας AKTA με τρόπο παρόμοιο με τις στήλες συσκευασμένης ρητίνης, διασφαλίζοντας ότι η κατεύθυνση ροής ευθυγραμμίζεται με τα βέλη και την κατεύθυνση εισόδου. Συνδέστε χρησιμοποιώντας συνδέσμους Luer ή εξαρτήματα σφιγκτήρα.

5.1.2 Ρυθμίστε το ρυθμό ροής εισόδου σε 5–10 MV/min και χρησιμοποιήστε ρυθμιστικό εξισορρόπησης για να καθαρίσετε τον αέρα. Συνεχίστε το ξέπλυμα μέχρι να μην παρατηρηθούν φυσαλίδες στην έξοδο και μετά συνδέστε την έξοδο του διηθήματος στο σύστημα χρωματογραφίας

5.2:Προ{0}}θεραπεία

5.2.1: Ρυθμίστε τον ρυθμό ροής εισόδου σε 5–10 MV/min και εκτελέστε προεπεξεργασία με 0,5 M NaOH για περισσότερα από 5 MV για να διασφαλίσετε ότι η μεμβράνη θα φτάσει σε ισορροπία.

5.2.2: Κάτω από τον ίδιο ρυθμό ροής, περαιτέρω προ-επεξεργασία με ρυθμιστικό διάλυμα εξισορρόπησης (1× PBS) για περισσότερα από 5 MV για να διασφαλιστεί ότι η μεμβράνη θα φτάσει σε ισορροπία.

5.3 Διαδικασία χρωματογραφίας

5.3.1

Ρυθμίστε τον ρυθμό ροής εισόδου σε 5–10 MV/min και προ{2}}επεξεργαστείτε με ρυθμιστικό διάλυμα εξισορρόπησης για περισσότερα από 5 MV έως ότου η μεμβράνη φτάσει σε ισορροπία.

5.3.2

Αφού το δείγμα προ-φιλτραριστεί μέσω ενός φίλτρου 0,22 μm, φορτώστε το δείγμα μέχρι να ολοκληρωθεί η φόρτωση ή να επιτευχθεί η χωρητικότητα φόρτωσης της χρωματογραφίας.

5.3.3

Πλύνετε με ρυθμιστικό διάλυμα εξισορρόπησης για περισσότερα από 10 MV έως ότου η απορρόφηση της υπεριώδους ακτινοβολίας μειωθεί στο βασικό επίπεδο.

5.3.4

Χρησιμοποιήστε βαθμιδωτή έκλουση ή γραμμική έκλουση σύμφωνα με το σχεδιασμό της διαδικασίας και συλλέξτε δείγματα σε κλάσματα όπως απαιτείται.

5.4,CIP Post-θεραπεία χρήσης – CIP συσκευής χρωματογραφίας μεμβράνης

5.4.1

Ρυθμίστε τον ρυθμό ροής εισόδου σε 5–10 MV/min και πραγματοποιήστε επεξεργασία καθαρισμού-επί τόπου-(CIP) με 0,5 M NaOH για περισσότερα από 10 MV έως ότου η απορρόφηση UV πέσει κάτω από τη γραμμή βάσης.

5.4.2

Μετά από πλύση σε κυκλοφορία για 30 λεπτά, μεταβείτε σε πλύση με νερό έως ότου το pH είναι μεταξύ 7–8 και, στη συνέχεια, συνεχίστε τον καθαρισμό με αιθανόλη 20% μέχρι η αγωγιμότητα να παραμείνει σχεδόν σταθερή.

5.5, Αποθήκευση χρωματογραφίας μεμβράνης:

Μετά τη χρήση και την ολοκλήρωση του CIP, η μονάδα μεμβράνης μπορεί να αφαιρεθεί και να αποθηκευτεί με εμβάπτιση σε αιθανόλη 20% ή να αποθηκευτεί online σε θερμοκρασία δωματίου σε διάλυμα αιθανόλης 20%. Το διάλυμα αιθανόλης 20% θα πρέπει να ελέγχεται και να αντικαθίσταται περιοδικά.

 

6.Πληροφορίες παραγγελίας

Φίλτρο κάψουλας χρωματογραφίας μεμβράνης ανταλλαγής ασθενούς ανιόντος-τύπου DEAE

	Εργαστηριακή-κλίμακα	μικρής κλίμακας	Πιλοτική κλίμακα	Κλίμακα παραγωγής
Μοντέλο προϊόντος	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Όγκος μεμβράνης	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Δημοφιλείς Ετικέτες: deae χρωματογραφία μεμβράνης ανταλλαγής ασθενούς ανιόντος, Κίνα, προμηθευτές, κατασκευαστές, εργοστάσιο, χονδρική, χύμα, σε απόθεμα, δωρεάν δείγμα