CM Weak Ion-Χρωματογραφία μεμβράνης ανταλλαγής

Εισαγωγή προϊόντος SP Strong Cion Exchange Membrane Chromatography 

 

2. Πλεονεκτήματα προϊόντος

Γρήγορη και αποτελεσματική Η υψηλή ικανότητα σύνδεσης μπορεί να επιτευχθεί με ρυθμούς ροής έως και 40 φορές ταχύτερους από την παραδοσιακή χρωματογραφία ρητίνης. Σε σύγκριση με τη συμβατική χρωματογραφία-βάσει ρητίνης, ο χρόνος διεργασίας με τη χρήση χρωματογραφίας μεμβράνης μπορεί να μειωθεί κατά 30–40 φορές. Ο τυπικός ρυθμός ροής λειτουργίας είναι περίπου 10 MV/min.

2.2 Η χρωματογραφία μεμβράνης υψηλής απόδοσης δέσμευσης παρουσιάζει υψηλή ικανότητα δέσμευσης και υψηλούς ρυθμούς ροής σε χαμηλή πτώση πίεσης, επιτρέποντας τη σύλληψη φορτισμένων βιομορίων με ένα μόνο πέρασμα μέσα από τη μονάδα.

2.3 Επεκτάσιμο και ευέλικτο Η πλήρης γκάμα προϊόντων χρωματογραφίας μεμβράνης μπορεί να καλύψει τις ποικίλες ανάγκες καθαρισμού βιομορίων, καλύπτοντας εφαρμογές από την ανάπτυξη διεργασιών έως την παραγωγή μεγάλης- κλίμακας. Ο σχεδιασμός της κάψουλας επιτρέπει τη λειτουργία μιας-χρήσης ή μπορεί να καθαριστεί και να επαναχρησιμοποιηθεί μετά από κατάλληλες διαδικασίες καθαρισμού.

2.4 Βελτιωμένη παραγωγικότητα Ο συμπαγής σχεδιασμός ελαχιστοποιεί το αποτύπωμα της εγκατάστασης. Με την εξάλειψη λειτουργιών όπως η πλήρωση στηλών, ο καθαρισμός, η επικύρωση καθαρισμού και η αποθήκευση στηλών, η επεξεργασία μπορεί να ξεκινήσει μετά από απλή εξισορρόπηση με σχετικά μικρότερο buffer. Δεδομένου ότι δεν υπάρχει ανάγκη για συσκευασία στηλών, καθαρισμό ή αποθήκευση, το κόστος εργασίας μπορεί να μειωθεί περισσότερο από 50%.

 

 

3 Τεχνικές Παράμετροι

3.1 Δομικά Υλικά

	Εργαστηριακή κλίμακα	μικρής κλίμακας	πιλοτική κλίμακα	κλίμακα παραγωγής
όγκος μεμβράνης	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Δομή υποστήριξης μεμβράνης	Πολυπροπυλένιο
περίβλημα μεμβράνης	Πολυπροπυλένιο
O δαχτυλίδι	Σιλικόνη

3.2 Λειτουργικά Χαρακτηριστικά

	Εργαστηριακή κλίμακα	μικρής κλίμακας	πιλοτική κλίμακα	κλίμακα παραγωγής
όγκος μεμβράνης	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Συνιστώμενος ρυθμός ροής	1-6 ml/λεπτό	25-150 ml/λεπτό	2-12 λίτρα/λεπτό	25-150 λίτρα/λεπτό
Μέγιστη θερμοκρασία λειτουργίας	35 μοίρες
Μέγιστη πίεση λειτουργίας	3 bar (25 μοίρες)
Μέγιστη διαφορά πίεσης	3 bar (25 μοίρες)
Συνθήκες αποθήκευσης	20% eθανόληaqueoussλύση

Η σύγκριση δείχνει ότι η διάρκεια ζωής της χρωματογραφίας μεμβράνης SP είναι συγκρίσιμη με εκείνη του SP Sepharose 6FF.

Εικόνα 1. Αλλαγές ικανότητας δέσμευσης της χρωματογραφίας μεμβράνης SP μετά από πολλαπλές χρήσεις που δοκιμάστηκαν με λυσοζύμη

Επιπλέον, αξιολογήσαμε τη χρωματογραφία μεμβράνης για την αποτελεσματικότητά της στην απομάκρυνση των πρωτεϊνών του κυττάρου ξενιστή και των νουκλεϊκών οξέων. Τα αποτελέσματα έχουν ως εξής:

	DNA				HCP
	Ανάκτηση IgG	Περιεκτικότητα (pg/mg IgG) με RT PCR		Συντελεστής Αφαίρεσης	Περιεχόμενο (ng/mg IgG) από την Elisa		Συντελεστής Αφαίρεσης
Τρέξιμο	%	Πριν από τη μεμβράνη Q	Μετά τη μεμβράνη Q	Κούτσουρο	Πριν από τη μεμβράνη Q	Μετά τη μεμβράνη Q	Κούτσουρο
1	96.4	423	3.6	2.07	7	4.3	0.21
2	97.4	438	4.3	2.01	7	4.7	0.17
3	94.1	513	5.8	1.95	6	2.3	0.42
4	96.2	32	0.8	1.60	6	3.2	0.27
5	96.3	45	1.9	1.37	8	3.4	0.37
6	96.7	158	2.4	1.82	8	3.5	0.36
7	96.4	267	2.6	2.01	9	6	0.18
8	96.8	298	3.6	1.92	9	7	0.11
9	97.9	746	9.8	1.88	4	1.5	0.43
10	96.2	39	3.2	1.09	4	1.4	0.46

Πίνακας 1. Ρυθμοί αφαίρεσης DNA και πρωτεΐνης κυττάρων ξενιστή σε CHO-Εκφρασμένο υλικό IgG με χρήση χρωματογραφίας μεμβράνης SP

Μια σειρά πειραμάτων απέδειξε ότι η χρωματογραφία μεμβράνης SP μπορεί να αφαιρέσει αποτελεσματικά τους ρύπους διατηρώντας παράλληλα υψηλό ρυθμό ανάκτησης του στόχου IgG.

Κατά τη σύγκριση της χρωματογραφίας μεμβράνης Gudiling SP με εισαγόμενες μάρκες, τα δεδομένα ικανότητας δέσμευσης είναι τα εξής:

Δεσμευτικόςcχωρητικότητα (mg/mL)	Σαρτόριους	ΞΕΘΥΜΑΙΝΩ	Καθοδήγηση
Λυσοζύμη	25	32	29
Τρυψίνη	22	27	25

Πίνακας 2. Απόδοση δεσμευτικής ικανότητας διαφορετικών πρωτεϊνών στο προϊόν μας και σε ανταγωνιστικές μάρκες

Η συνολική αξιολόγηση δείχνει ότι η δεσμευτική μας ικανότητα είναι συγκρίσιμη με αυτή των εισαγόμενων προϊόντων.

Σχήμα 2. Δοκιμή ικανότητας δέσμευσης της μονάδας χρωματογραφίας μεμβράνης SP χρησιμοποιώντας λυσοζύμη ως πρότυπο

Σε σύγκριση με την ικανότητα δυναμικής δέσμευσης και τα εισαγόμενα προϊόντα, επιβεβαιώθηκε ότι οι περισσότερες πρωτεΐνες-στόχοι μπορούν να συλληφθούν όταν η λυσοζύμη εκλούεται σε 190 mM NaCl.

Μέσω διαφορετικών συνθηκών έκλουσης, διαπιστώσαμε ότι τα προφίλ έκλουσης της χρωματογραφίας μεμβράνης είναι παρόμοια με αυτά της γέλης αγαρόζης, αλλά η καθαρότητα των πρωτεϊνών ποικίλλει σημαντικά σε διαφορετικές συγκεντρώσεις άλατος. Στην πραγματική Ε&Α και παραγωγή, είναι απαραίτητος ο ποσοτικός προσδιορισμός των βέλτιστων συνθηκών έκλουσης για τη λήψη πρωτεϊνών-στόχων υψηλής{1}καθαρότητας.

 

4 Τυπικές περιπτώσεις εφαρμογής

Αφαίρεση DNA, ιών και πρωτεϊνών του κυττάρου ξενιστή

Σύλληψη πλασμιδίων, ιών, πρωτεϊνών και καθαρισμός ολιγονουκλεοτιδίων

Αφαίρεση χρωστικών από ζωμό ζύμωσης ζύμης και δέσμευση πρωτεΐνης υψηλής- ικανότητας

 

5 Διαδικασία χρήσης

5.1 Προετοιμασία και συναρμολόγηση εξοπλισμού:

5.1.1: Εγκαταστήστε τη μονάδα χρωματογραφίας μεμβράνης σε ένα σύστημα χρωματογραφίας ÄKTA ακολουθώντας διαδικασίες παρόμοιες με τις στήλες ρητίνης, διασφαλίζοντας ότι η κατεύθυνση ροής ευθυγραμμίζεται με τα βέλη της μονάδας και τον προσανατολισμό εισόδου. Συνδέστε τη μονάδα χρησιμοποιώντας κλειδαριές Luer ή εξαρτήματα στυλ{2}}σφιγκτήρα για ασφαλή ενσωμάτωση στο σύστημα.

5.1.2 Ρυθμίστε τον ρυθμό ροής τροφοδοσίας σε5–10 MV/minκαι απαερώνει τη μονάδα χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό διάλυμα εξισορρόπησης, διασφαλίζοντας ότι τα απόβλητα είναι απαλλαγμένα από φυσαλίδες αέρα. Μόλις απαερωθεί, συνδέστε την έξοδο του διηθήματος στο σύστημα χρωματογραφίας.

5.2:Προ-Θεραπεία χρήσης:

5.2.1:

Ρυθμίστε τον ρυθμό ροής τροφοδοσίας σε5–10 MV/minκαι πραγματοποιήστε προ-θεραπεία με0,5 M NaOH για περισσότερα από 5 MV, διασφαλίζοντας ότι η μεμβράνη φτάνει σε πλήρη ισορροπία.

5.2.2: Με τον ίδιο ρυθμό ροής, πραγματοποιήστε προ-επεξεργασία με1 M NaCl για περισσότερα από 5 MVώστε η μεμβράνη να φτάσει σε πλήρη ισορροπία.

5.3 Διαδικασία χρωματογραφίας

5.3.1 Ρυθμίστε τον ρυθμό ροής τροφοδοσίας σε 5–10 MV/min και εξισορροπήστε τη μεμβράνη με ρυθμιστικό διάλυμα εξισορρόπησης για περισσότερα από 5 MV, έως ότου η μεμβράνη φτάσει σε πλήρη ισορροπία.

5.3.2 Μετά από 0,22 μm προ-διήθησης, φορτώστε το δείγμα στη μεμβράνη μέχρι να ολοκληρωθεί η φόρτωση του δείγματος ή να επιτευχθεί η χρωματογραφική ικανότητα δέσμευσης.

5.3.3 Πλύσιμο με ρυθμιστικό διάλυμα εξισορρόπησης για περισσότερα από 10 MV έως ότου το σήμα UV επιστρέψει στη γραμμή βάσης.

5.3.4 Εφαρμόστε βαθμιδωτή έκλουση ή σταδιακή έκλουση σύμφωνα με το σχεδιασμό της διαδικασίας και συλλέξτε τα κλάσματα όπως απαιτείται.

5.4 Δημοσίευση CIP-Χρήση θεραπείας – Συσκευή χρωματογραφίας μεμβράνης CIP (Καθαρισμός στη θέση του)

5.4.1 Ρυθμίστε τον ρυθμό ροής τροφοδοσίας σε 5–10 MV/min και πραγματοποιήστε καθαρισμό με 1 M NaOH για περισσότερα από 10 MV, έως ότου το σήμα UV μειωθεί κάτω από τη γραμμή βάσης.

5.4.2 Αφού κυκλοφορήσετε για 30 λεπτά, μεταβείτε σε πλύση με νερό έως ότου το pH φτάσει στο 7–8 και μετά συνεχίστε τον καθαρισμό με αιθανόλη 20% έως ότου η αγωγιμότητα γίνει σχεδόν σταθερή.

5.5 Αποθήκευση χρωματογραφίας μεμβράνης

Μετά τη χρήση και την ολοκλήρωση του CIP, η μονάδα μεμβράνης μπορεί να αφαιρεθεί και να αποθηκευτεί με εμβάπτιση σε αιθανόλη 20% ή μπορεί να αποθηκευτεί σε-σειρά σε θερμοκρασία δωματίου σε διάλυμα που περιέχει 20% αιθανόλη. Το διάλυμα αιθανόλης 20% θα πρέπει να ελέγχεται και να αντικαθίσταται περιοδικά.

 

6. Πληροφορίες παραγγελίας

Φίλτρο κάψουλας χρωματογραφίας μεμβράνης ανταλλαγής ανιόντων Q Strong

	Εργαστηριακή κλίμακα	μικρής κλίμακας	πιλοτική κλίμακα	κλίμακα παραγωγής
Μοντέλο προϊόντος	IEXQ0002ES	IEXQ0050ES	IEXQ0400ES	IEXQ5000ES
Όγκος μεμβράνης	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Δημοφιλείς Ετικέτες: cm ασθενούς ιόντος-χρωματογραφία μεμβράνης ανταλλαγής, Κίνα, προμηθευτές, κατασκευαστές, εργοστάσιο, χονδρική, χύμα, σε απόθεμα, δωρεάν δείγμα