Μελέτη σχετικά με την ικανότητα σάρωσης ιών του μονοκλωνικού αντισώματος κατά τη διαδικασία

Nov 18, 2024

Τα προϊόντα βιοτεχνολογίας που προέρχονται από κυτταρικές σειρές ενδέχεται να διατρέχουν κίνδυνο μόλυνσης από ιούς - η έκταση εξαρτάται από διάφορους παράγοντες, όπως η πηγή παρασκευής, οι πρώτες ύλες που χρησιμοποιούνται, το σύστημα παραγωγής, τα αντιδραστήρια καθαρισμού και τα έκδοχα. Η μελέτη της αφαίρεσης ή της αδρανοποίησης ιών στη διαδικασία παραγωγής είναι ένα βασικό βήμα για τη μείωση της πιθανότητας ιατρογενούς μετάδοσης παθογόνων ιών και συνεπώς τη μείωση του κινδύνου, ο οποίος είναι απαραίτητος για την ασφάλεια των προϊόντων. Προτού τα βιολογικά προϊόντα εισέλθουν σε κλινικές δοκιμές και διατεθούν στην αγορά, η διαδικασία παραγωγής τους πρέπει να αποδειχθεί ότι έχει την ικανότητα να αφαιρεί γνωστούς και υποτιθέμενους ιούς.

Η έρευνα σχετικά με την ικανότητα απομάκρυνσης του ιού γίνεται συνήθως με την προσθήκη του γνωστού ιού δείκτη τίτλου στο ενδιάμεσο προϊόν σε διαφορετικά στάδια παραγωγής, στη συνέχεια με τον προσδιορισμό του υπολειπόμενου τίτλου του ιού στο δείγμα που έχει υποστεί επεξεργασία με μια συγκεκριμένη διαδικασία και, τέλος, με την αξιολόγηση της τιμής μείωσης του ημερολογίου (LRV). του τίτλου του ιού. Τα βήματα διαδικασίας για LRV Μεγαλύτερο ή ίσο με 4log10 θεωρούνται γενικά αποτελεσματικά βήματα αφαίρεσης ιού. Η διαδικασία με το LRV<41og10 can be considered as helpful to increase the total virus clearance in the production process. However, due to the limitations of virus verification, the process with LRV≤11og10 has little significance for virus removal, and its LRV value is not included in the total amount of the production process.

Κατά τη χρήση της μεθόδου της προσομοιωμένης διαδικασίας παραγωγής (μειωμένη διαδικασία), είναι απαραίτητο να σχεδιαστεί ένα εύλογο σχέδιο έρευνας και δοκιμής αφαίρεσης/απενεργοποίησης ιού που σχετίζεται με την πραγματική διαδικασία παραγωγής στο μέτρο του δυνατού, ειδικά τα αποτελεσματικά βήματα της διαδικασίας παραγωγής. Η προσομοιωμένη διαδικασία θα πρέπει να είναι αυστηρά συνεπής με την πραγματική διαδικασία όσον αφορά τις παραμέτρους δοκιμής και τις συνθήκες ελέγχου.

Οι κοινοί ιοί δεικτών φαίνονται στον Πίνακα 1.

Στο στάδιο της ερευνητικής εφαρμογής νέου φαρμάκου (IND), ένα βιοτεχνολογικό προϊόν απαιτεί μελέτες κάθαρσης ιών για τουλάχιστον 2 μοντέλα ιών, επιλέγοντας συνήθως έναν ρετροϊό (X-MuLV) και έναν παρβοϊό (MMV). Κατά τη φάση της αίτησης άδειας βιολογικών προϊόντων (BLA), οι μελέτες αφαίρεσης ιών διεξάγονται συνήθως με χρήση 3-5 ειδικών/μη ειδικών ιών και αξιολογούνται 3-5 βήματα της διαδικασίας για να αποδειχθεί ότι το προϊόν έχει επαρκή παράγοντα ασφάλειας από προοπτική ασφάλειας του ιού. Λόγω διαφορετικών κατευθυντήριων γραμμών στο εσωτερικό και στο εξωτερικό, υπάρχουν ορισμένες διαφορές στα βήματα επαλήθευσης εκκαθάρισης του ιού που χρησιμοποιούνται για τις δηλώσεις. Τα συνήθως χρησιμοποιούμενα σχήματα επαλήθευσης εκκαθάρισης ιών στη διαδικασία παραγωγής mAb παρουσιάζονται στον Πίνακα 2.

Από το 2009, προϊόντα μονοκλωνικών αντισωμάτων υποβλήθηκαν στον FDA για IND και BLA, χρωματογραφία συγγένειας πρωτεΐνης Α, χαμηλό pH, χρωματογραφία ανταλλαγής ανιόντων AEX (τρόπος διείσδυσης ροής), χρωματογραφία ανταλλαγής κατιόντων CEX (σύνδεση - λειτουργία έκλουσης) και επικύρωση κάθαρσης ιού εξαιρουμένης Το φιλτράρισμα ιών είναι οι πιο συχνά χρησιμοποιούμενες οικογένειες ιών δεικτών και ο μέσος όρος και το εύρος των επιδράσεων κάθαρσής τους παρουσιάζονται στο Εικόνα 1.

Για τους ρετροϊούς, με εξαίρεση τον CEX, ο οποίος έχει LRV περίπου 3log10 (όπως φαίνεται στο γράφημα ράβδων Α στο Σχήμα 1), οι άλλες διεργασίες ήταν ισχυρές (LRV μεγαλύτερο ή ίσο με 4log10). Οι ερπητοϊοί και οι ρετροϊοί έχουν παρόμοια αποτελέσματα κάθαρσης και LRV > 4log10 (όπως φαίνεται στο γράφημα ράβδων Β στο Σχήμα 1). Οι μικροί ιοί χωρίς περίβλημα, όπως ο παρβοϊός, είναι πιο δύσκολο να αφαιρεθούν αποτελεσματικά, είναι ανθεκτικοί στη χημική επεξεργασία και δεν παγιδεύονται εύκολα από τα φίλτρα (που φαίνεται στο διάγραμμα ράβδων C στο Σχήμα 1). Μόνο τα φίλτρα AEX και μικρά ιούς ήταν αποτελεσματικά στην αφαίρεση των παρβοϊών (μέσος όρος LRV > 4log10).

Οι διεργασίες που φαίνονται στο Σχήμα 1 είναι ProteinA, AEX (τρόπος διείσδυσης ροής), CEX (τρόπος συνδιαλλαγής-έκλουσης), αδρανοποίηση χαμηλού pH (" ατελής "έναντι" πλήρους "αφαίρεσης) και φιλτράρισμα από ιούς μεγάλου και μικρού ανοίγματος.

Η κατανομή των τιμών LRV για κάθε διεργασία φαίνεται στο Σχήμα 2. Οι μελέτες με 0 ~ 21og10 ταξινομήθηκαν ως ομάδα χαμηλού LRV και εκείνες με περισσότερες από 6log10 ταξινομήθηκαν ως ομάδα υψηλού LRV για συγκριτική ανάλυση.

Δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της τιμής LRV της διεργασίας Πρωτεΐνης Α και του ρυθμιστικού διαλύματος ισορροπίας/πλύσης, του πληρωτικού, της σύνθεσης του εκλούτη και της τιμής του pH έκλουσης. Ο κοινός παρονομαστής της ομάδας χαμηλού LRV είναι ότι η πρώτη ύλη είναι αρκετά περίπλοκη και μπορεί η πολύπλοκη αλληλεπίδραση πρώτης ύλης και πληρωτικού να επηρεάζει αρνητικά την ικανότητα της χρωματογραφικής στήλης να αφαιρεί ιούς.

Οι Strauss et al. έδειξε ότι το pH και η αγωγιμότητα των δειγμάτων AEX μπορούν να επηρεάσουν το LRV. Ωστόσο, τα στατιστικά αποτελέσματα των Miesegaes et al έδειξαν ότι, παρόμοια με την ProteinA, το LRV του AEX (τρόπος διείσδυσης ροής) δεν είχε σημαντική συσχέτιση με διαφορετικά ρυθμιστικά διαλύματα, πληρωτικά, pH και αγωγιμότητα, κάτι που μπορεί να οφείλεται στη βελτιστοποίηση του pH και της αγωγιμότητας. στις συνθήκες διαδικασίας της αναφερόμενης περίπτωσης.

Η αφαίρεση του ιού με τη διαδικασία CEX δεν είναι αρκετά ισχυρή. Δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ του LRV στην ομάδα υψηλού LRV και του ρυθμιστικού διαλύματος, του επιπέδου εμπειρίας ή οποιωνδήποτε ιδιοτήτων χρωματογραφικής στήλης, όπως το ύψος της στήλης και ο τύπος ρητίνης. Ωστόσο, οι τιμές pH ισορροπίας/φόρτωσης και έκλουσης που χρησιμοποιήθηκαν στη μελέτη υψηλού LRV ήταν και οι δύο χαμηλότερες, στο 5,3±0.2. Στην ομάδα χαμηλού LRV, το pH ήταν 6.0±0.2. Ένας άλλος παράγοντας είναι ότι η συγκέντρωση αλατιού στο ρυθμιστικό μπορεί επίσης να προκαλέσει τη διαφορά τιμής LRV. Το ρυθμιστικό που χρησιμοποιήθηκε στη μελέτη χαμηλού LRV είχε υψηλότερη συγκέντρωση άλατος, με μέση συγκέντρωση 290±120 mM στο διάλυμα φόρτωσης/εξισορρόπησης και 340±70 mM στο υγρό έκλουσης, ενώ οι συγκεντρώσεις NaCl στη μελέτη υψηλού LRV ήταν 58 ±27 mM και 183±31 mM αντίστοιχα.

Στη διαδικασία χαμηλού pH, το pH είναι μια βασική παράμετρος της διαδικασίας και ένα pH 3,8 είναι αρκετό για να απενεργοποιήσει τον ρετροϊό κατά βαθμό . Η ομάδα χαμηλού LRV είχε pH 3,9, ενώ η μελέτη με υψηλό LRV είχε pH 3,4.

Και για τα φίλτρα μικρού και μεγάλου διαφράγματος, η τιμή LRV της αφαίρεσης MuLV δεν ήταν μικρότερη από 2log10 και μόνο το 1% των μελετών ήταν κάτω από 3log10 (φαίνεται στις στήλες h και i στο Σχήμα 2). Η συνολική κάθαρση των ρετροϊών από φίλτρα ιού μεγάλου ανοίγματος ήταν χαμηλότερη από αυτή των φίλτρων ιών μικρού ανοίγματος (όπως φαίνεται στο διάγραμμα C-bar στο Σχήμα 1). Ο κύριος λόγος που επηρεάζει το αποτέλεσμα της αφαίρεσης του παρβοϊού είναι οι διαφορετικοί τύποι φίλτρων. Γενικά, το φιλτράρισμα κατά των ιών μπορεί να αφαιρέσει αξιόπιστα τους ιούς.

Οι διεργασίες είναι πρωτεΐνη A(a), λειτουργία διείσδυσης AEX (b), σύνδεση CEX - λειτουργία έκλουσης (c), σύνδεση AEX Ⅰ λειτουργία έκλουσης (d), αδρανοποίηση χαμηλού pH (" ελλιπής "και" πλήρης "κάθαρση)(e ~ g), και μεγάλο μέγεθος πόρων (h) και μικρό μέγεθος πόρων (i ~ j) διήθηση απο ιούς (όπου, a ~ i: Ρετροϊός· j: Παρβοϊός).

Η συνεχής ανάπτυξη και καινοτομία στον τομέα των κατάντη βιοφαρμακευτικών διεργασιών θα επιφέρει αναπόφευκτα καινοτομίες στην αξιολόγηση της κάθαρσης του ιού. Η πρόοδος σε διαδικασίες ανάντη και κατάντη -όπως οι βιοδιεργασίες συνεχούς ροής- έχουν καταστήσει απαραίτητη την αξιολόγηση και την καθιέρωση αποτελεσματικών και ισχυρών διαδικασιών αφαίρεσης ιών. Κατά τη διάρκεια της συνεχούς ροής, βήματα όπως η απενεργοποίηση ιών και το φιλτράρισμα ιών αναμένεται να εκτελούνται σε λειτουργία δέσμης. Αν και η ικανότητα απομάκρυνσης του ιού των χρωματογραφικών διεργασιών σε λειτουργία συνεχούς ροής δεν θα πρέπει να διαφέρει ουσιαστικά από αυτή της επεξεργασίας κατά παρτίδες, πρέπει να υποστηρίζεται από δεδομένα.

Από την άποψη της ιολογικής ασφάλειας, η εξαιρετική ασφάλεια της βιοφαρμακευτικής βιομηχανίας μπορεί σε μεγάλο βαθμό να αποδοθεί στην αυστηρή τήρηση τριών βασικών στρατηγικών για την ασφάλεια από ιούς: επαρκής προμήθεια και δοκιμή πηγών υλικών και κυτταρικών τραπεζών, τεκμηρίωση αξιολογήσεων εκκαθάρισης ιών (μελέτες επικύρωσης ιών) και δοκιμή ιών κατά τη διαδικασία. Τα χαρακτηριστικά των βιολογικών φαρμάκων που παράγονται από νέα κυτταρικά υποστρώματα μπορεί να αλλάξουν με διαφορετικούς κινδύνους και απαιτούνται καλές στρατηγικές διαχείρισης κινδύνου για τη διασφάλιση της ασφάλειας των βιολογικών φαρμάκων. Η Guidling Technology διαθέτει έμπειρη επαγγελματική τεχνική ομάδα, που καλύπτει τη διαδικασία φιλτραρίσματος από μικρή δοκιμή, πιλοτική δοκιμή, έως παραγωγή μεγάλης κλίμακας, τα φίλτρα μεμβράνης και μεμβράνης χρησιμοποιούνται ευρέως σε προφιλτράρισμα, μικροδιήθηση, υπερδιήθηση, συγκέντρωση νανοδιήθησης, εκχύλιση και διαχωρισμό. Οι πολλές σειρές προϊόντων μας, από μικρά εργαστηριακά φιλτραρίσματα μιας χρήσης έως συστήματα φιλτραρίσματος προσανατολισμένα στην παραγωγή, δοκιμές στειρότητας, ζύμωση, κυτταροκαλλιέργεια και άλλα, εξασφαλίζουν αυξημένη παραγωγικότητα.

Jiuling για τη διασφάλιση της ποιότητας των προϊόντων ως πρώτο δείκτη, στην επιδίωξη "μείωσης κόστους, αύξησης της αποτελεσματικότητας" στο δρόμο για εξερεύνηση, ανυπομονούμε να συνεργαστούμε μαζί σας στο μέλλον για να αντιμετωπίσουμε τις προκλήσεις του κλάδου και να αναζητήσουμε καλύτερη ανάπτυξη.

Ένα ζευγάρι: Μετοχή υπόθεσης|Απλή και αποτελεσματική διαδικασία συλλογής εμβολίων

Επόμενη: Μελέτη για την εφαρμογή της βαθιάς διήθησης στη διαδικασία παραγωγής του εμβολίου κατά του αφθώδους πυρετού