Μέθοδος συντήρησης και χρήσης σωλήνα υπερδιήθησης

Μέθοδος συντήρησης και χρήσης σωλήνα υπερδιήθησης

Λειτουργία του σωλήνα υπερδιήθησης:

1) Συγκέντρωση? 2) Αφαλάτωση? 3) Αντικατάσταση buffer? 4) Έχει την επίδραση του μερικού καθαρισμού.

1. Ο νέος σωλήνας υπερδιήθησης μπορεί να χρησιμοποιηθεί απευθείας χωρίς άλλη επεξεργασία.

2. Ο σωλήνας υπερδιήθησης δεν μπορεί να αποστειρωθεί σε υψηλή θερμοκρασία.

3. Επεξεργασία του σωλήνα υπερδιήθησης κατά την αλλαγή συμπυκνωμένης πρωτεΐνης

Ο σωλήνας υπερδιήθησης μπορεί να επαναχρησιμοποιηθεί. Μουλιάστε το σε 0.1M NaOH για 1-2 ώρες, πλύνετέ το με νερό και στη συνέχεια πλύνετέ το με σχετικό διάλυμα (αποστειρωμένο νερό ή PBS) στη φυγόκεντρο για 3 φορές, το οποίο μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη συμπύκνωση νέας πρωτεΐνης.

4. Επεξεργασία κανονικά τοποθετημένου σωλήνα υπερδιήθησης

Για τον συχνά χρησιμοποιούμενο σωλήνα υπερδιήθησης, μουλιάστε τον σε 0.1M NaOH για 1-2 ώρες, πλύντε τον με νερό και μουλιάστε τον σε αποστειρωμένο νερό. Φροντίστε να διατηρείτε τη μεμβράνη του φίλτρου υγρή και να αποτρέψετε την ανάπτυξη βακτηρίων.

5. Θεραπεία του σωλήνα υπερδιήθησης που τοποθετείται για μεγάλο χρονικό διάστημα

Εάν ο σωλήνας υπερδιήθησης δεν χρησιμοποιηθεί για μεγάλο χρονικό διάστημα, εμποτίστε τον σε 0.1M NaOH για 1-2 ώρες, πλύντε τον με νερό και μουλιάστε τον σε αιθανόλη 20 τοις εκατό για αποθήκευση. Φροντίστε να διατηρείτε τη μεμβράνη του φίλτρου υγρή και να αποτρέψετε την ανάπτυξη βακτηρίων.

6. Φυγοκεντρική ταχύτητα που χρησιμοποιείται για σωλήνα υπερδιήθησης

Η ταχύτητα της φυγόκεντρου είναι γενικά 4000 rpm (συνιστώνται γενικά 3000 g και η μέγιστη δεν μπορεί να υπερβαίνει τα 4000 g). Μετά από φυγοκέντρηση για 5-8 λεπτά, δείγμα 4 ml μπορεί να συγκεντρωθεί σε λιγότερο από 1 ml έως δεκάδες μικρολίτρα. Εάν η ταχύτητα είναι πολύ υψηλή, η πρωτεΐνη στόχος θα πέσει, με αποτέλεσμα την απώλεια της πρωτεΐνης στόχου. Χαμηλή ταχύτητα, χρονοβόρα και χαμηλή απόδοση εργασίας.

7. Προφυλάξεις όταν η κεφαλή του πιστολιού εκτείνεται στον σωλήνα υπερδιήθησης

Κατά την προσθήκη διαλύματος πρωτεΐνης ή ρυθμιστικού διαλύματος στον σωλήνα υπερδιήθησης, μπορεί να χρησιμοποιηθεί η μπλε κεφαλή πιστολιού. Ωστόσο, όταν η συμπυκνωμένη πρωτεΐνη στόχος απορροφάται από τον πυθμένα του σωλήνα υπερδιήθησης, πρέπει να χρησιμοποιείται η κίτρινη κεφαλή πιστολιού. Όταν η κεφαλή του πιστολιού εισάγεται στον σωλήνα υπερδιήθησης, πρέπει να εμποδίζεται να αγγίζει τη μεμβράνη του φίλτρου για να αποφευχθεί η διάτρηση της μεμβράνης του φίλτρου.

8. Μειώστε την απώλεια απορρόφησης πρωτεΐνης του σωλήνα υπερδιήθησης

Η μεμβράνη του σωλήνα υπερδιήθησης μπορεί να προσροφήσει πρωτεΐνη, η οποία θα μειώσει την πρωτεΐνη στόχο κατά περίπου 30 τοις εκατό. Προκειμένου να μειωθεί η απώλεια πρωτεΐνης, μετά την απορρόφηση του διαλύματος πρωτεΐνης στόχου, καθαρίστε το κάτω μέρος του σωλήνα υπερδιήθησης με ρυθμιστικό πρωτεϊνών για να πλύνετε το μεγαλύτερο μέρος της πρωτεΐνης που απορροφάται από τη μεμβράνη του φίλτρου και να μειώσετε την απώλεια της πρωτεΐνης στόχου. Εάν η καθαρισμένη πρωτεΐνη είναι συμπυκνωμένη, προσέξτε ότι ο συμπυκνωμένος όγκος δεν πρέπει να είναι πολύ μικρός. Γενικά, ανεξάρτητα από το πόσο φυγοκεντρημένο, περίπου 200 μL διαλύματος πρωτεΐνης θα διατηρηθούν στον πυθμένα.

9. Πώς να ορίσετε την αστοχία του σωλήνα υπερδιήθησης

Υπό κανονική χρήση, όταν η μεμβράνη φίλτρου δεν τρυπιέται, το διάλυμα συμπυκνωμένης πρωτεΐνης δεν περιέχει πρωτεΐνη ή η ποσότητα είναι πολύ χαμηλή (συμπεριλαμβανομένης της πρωτεΐνης στόχου), ενώ το πρώτο φιλτραρισμένο διάλυμα περιέχει πρωτεΐνη-στόχο, υποδεικνύει ότι η μεμβράνη φίλτρου δεν είναι έγκυρη και πρέπει να αντικατασταθεί με νέο σωλήνα υπερδιήθησης.