Συχνές ερωτήσεις σχετικά με τις συσκευές φυγόκεντρου φίλτρου
Q1. Είναι απαραίτητο να διαχωριστούν πρωτεΐνες διαφορετικών μοριακών βαρών, οπότε πόση διαφορά χρειάζονται τα μοριακά βάρη των πρωτεϊνών;
Α: Το μέγεθος των δύο πρωτεϊνών πρέπει να διαφέρει κατά 10 φορές ή περισσότερο.
Q2. Μπορεί να φυγοκεντρήσειαλΟι συσκευές φίλτρου είναι αποστειρωμένες και ανθεκτικές στο πλύσιμο με αλκάλια;
Α: Μπορεί να αποστειρωθεί με 75 τοις εκατό υδατικό διάλυμα αιθανόλης και η μεμβράνη μπορεί να αντέξει 0.1-0.5Ν πλύση με αλκάλιο υδροξειδίου του νατρίου.
Q3. Πώς να αντιμετωπίσετε εάν η πρωτεΐνη κατακρημνίστηκε κατά τη συμπύκνωση;
Α: Εάν η πρωτεΐνη συμπυκνωθεί πολύ γρήγορα ή πολύ συμπυκνωμένη, μπορεί να προκαλέσει καθίζηση πρωτεΐνης και η τελική συγκέντρωση της πρωτεΐνης μετά τη συγκέντρωση δεν πρέπει να είναι πολύ υψηλή. Πρωτεΐνες που είναι ευαίσθητες στον ρυθμό συγκέντρωσης και τείνουν να καθιζάνουν, προτεινόμενη μέθοδος βελτίωσης:
Μειώστε την ταχύτητα της φυγόκεντρου
Χρησιμοποιήστε μεμβράνη υπερδιήθησης με αποκοπή υψηλότερου μοριακού βάρους
Φυσήξτε και αναρροφήστε τον συμπυκνωμένο σωλήνα και στη συνέχεια φυγοκεντρήστε
Q4. Ποιος είναι ο πιθανός λόγος για τον οποίο τοφυγοκεντρικές συσκευές φίλτρουδεν μπορεί να φυγοκεντρηθεί κάτω;
Α: Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε περίπου 20 τοις εκατό υδατικό διάλυμα αιθανόλης για την αρχική φυγοκέντρηση εάν ο σωλήνας υπερδιήθησης δεν μπορεί να φυγοκεντρηθεί, επειδή η μεμβράνη υπερδιήθησης είναι εντελώς στεγνή, η επιφάνεια της μεμβράνης είναι ασθενώς υδρόφοβη και η ροή μπορεί να αποκατασταθεί μετά από διήθηση με χαμηλή διαλύτης επιφανειακής τάσης.
Q5. Σωστές μέθοδοι χρήσης και αποθήκευση συσκευών φυγόκεντρου φίλτρου
Α: Οι συσκευές φυγοκεντρικού φίλτρου θα πρέπει να φυγοκεντρούνται με καθαρό νερό πριν από τη χρήση για να επαληθευτεί η ακεραιότητά τους. Μετά από κάθε χρήση, απαιτείται η αποθήκευση σε υγρή κατάσταση για να αποφευχθεί η ξήρανση της μεμβράνης.
Q6. Πώς αφαιρούν την ενδοτοξίνη οι συσκευές φυγόκεντρου φίλτρου;
Α: Οι συσκευές φυγόκεντρου φίλτρου που παρέχουμε δεν έχουν υποστεί επεξεργασία με ενδοτοξίνες και επειδή οι ενδοτοξίνες υπάρχουν ευρέως στη φύση, τα δείγματα που απαιτούν ενδοτοξίνες μπορούν να προκαθαριστούν με 0.5N υδροξείδιο νατρίου πριν από το πείραμα και στη συνέχεια να πλυθούν με RO νερό για την απομάκρυνση του μεγαλύτερου μέρους της ενδοτοξίνης.
Q7. Όταν η συμπυκνωμένη πρωτεΐνη χρησιμοποιείται για ανάλυση κατάντη, διαπιστώνεται ότι υπάρχει παρεμβολή, ποιος είναι ο λόγος;
Α: Οι συσκευές φυγόκεντρου φίλτρου μπορούν να προπλυθούν με ρυθμιστικό διάλυμα ή καθαρό νερό. Εάν η παρεμβολή εξακολουθεί να υπάρχει, πλύνετε με 0.1Ν υδροξείδιο του νατρίου και, στη συνέχεια, πλύνετε με καθαρό νερό.
Q8. It βρέθηκε ότι δεν υπάρχει πρωτεΐνη στόχος στο συμπύκνωμα μετά τη συμπύκνωση. Ποιοι είναι οι πιθανοί λόγοι;
Α: 1) Η αρχική συγκέντρωση της πρωτεΐνης δεν πρέπει να είναι πολύ χαμηλή, εάν η συγκέντρωση είναι πολύ χαμηλή, η μεμβράνη μπορεί να μην μπορεί να συγκρατηθεί.
2)Επιλέξτε το κατάλληλο μέγεθος πόρων μεμβράνης. Η φυγοκεντρική συγκέντρωση του σωλήνα φίλτρου ανήκει σε αδιέξοδη διήθηση και το μέγεθος των πόρων της μεμβράνης είναι γενικά μικρότερο από 2 φορές ή περισσότερο από την πρωτεΐνη στόχο.
3)Επιλέξτε τη σωστή φυγόκεντρη ταχύτητα
4)Εάν η πρωτεΐνη στόχος κατακρημνίζεται
Q9. Επεξεργασία παθητικοποίησης συσκευών φυγόκεντρου φίλτρου
Α: Η προεπεξεργασία παθητικοποίησης της επιφάνειας των συσκευών φυγόκεντρου φίλτρου μπορεί να μειώσει την απώλεια προσρόφησης πρωτεΐνης στην επιφάνεια της μεμβράνης, στις περισσότερες περιπτώσεις, η προεπεξεργασία της στήλης πριν από τη συμπύκνωση του διαλύματος αραιωμένης πρωτεΐνης μπορεί να βελτιώσει την ανάκτηση, Επειδή το διάλυμα μπορεί να γεμίσει το εκτεθειμένο κενές θέσεις προσρόφησης πρωτεϊνών στη μεμβράνη και την επιφάνεια, η μέθοδος παθητικοποίησης είναι να εμποτιστεί η στήλη με μεγάλο όγκο διαλύματος παθητικοποίησης για περισσότερο από 1 ώρα, να ξεπλυθεί καλά η στήλη με απεσταγμένο νερό και στη συνέχεια να φυγοκεντρηθεί η στήλη μία φορά με απεσταγμένο νερό για να αφαιρέσετε εντελώς το διάλυμα παθητικοποίησης που μπορεί να παραμείνει στη μεμβράνη, προσέξτε να μην στεγνώσει η μεμβράνη μετά την παθητικοποίηση, εάν θέλετε να τη διατηρήσετε για μελλοντική χρήση, πρέπει να προσθέσετε αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό για να διατηρείται η μεμβράνη υγρή. οι μηχανικοί μας για κοινές λύσεις παθητικοποίησης.
Q10. Η μεμβράνη υπερδιήθησης φιλτράρει τα μόρια ιεραρχικά;
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >Ωστόσο, 95 τοις εκατό εάν χρησιμοποιείται μεμβράνη υπερδιήθησης 100 kd, μόρια μικρότερα από το μέγεθος των πόρων της μεμβράνης δεν περνούν εντελώς ελεύθερα από τη μεμβράνη. Ο ρυθμός μοριακής κατακράτησης των 67kd είναι περισσότερο από 70 τοις εκατό και η πρωτεΐνη των 43kd είναι επίσης περισσότερο από 40 τοις εκατό αποκομμένη, τα διάφορα συστατικά σε ένα μικτό διάλυμα περνούν μέσα από τη μεμβράνη όχι τόσο απλά και εύκολα όσο ένα διάλυμα ενός συστατικού, στην πράξη , εάν θέλετε να απομονώσετε δύο μακρομόρια, η διαφορά μοριακού βάρους μεταξύ τους θα πρέπει να είναι οκτώ φορές ή περισσότερο.
Q11. Πώς να διαχωρίσετε αποτελεσματικά μεγάλα και μικρά μόρια μέσω υπερδιήθησης;
Α: Λόγω των αναγκών της διαδικασίας, αφαιρούνται οι ακαθαρσίες στα μακρομόρια ή αφαιρούνται τα μικρά μόρια από τα μακρομόρια, είναι φυσιολογικό στην παραγωγή. Είναι πολύ απαραίτητο να επιλέξετε το κατάλληλο μέγεθος πόρων μεμβράνης, τη μέθοδο φιλτραρίσματος και τις συνθήκες λειτουργίας. Σε γενικές γραμμές, εάν επιλεγεί η προδιαγραφή MWCO της μεμβράνης μεταξύ των δύο πρωτεϊνών, μπορεί να επιτευχθεί ένας σχετικά ιδανικός διαχωρισμός. Εάν το διάλυμα πρωτεΐνης είναι σχετικά αραιό, η λειτουργία υπό χαμηλή πίεση θα βοηθήσει επίσης στην επίτευξη καλύτερων αποτελεσμάτων. Επιλέξτε διήθηση εφαπτομενικής ροής και εκτελέστε πολλαπλή διαδιήθηση για να έχετε καλύτερο αποτέλεσμα διαχωρισμού.
