Μια αποτελεσματική και χαμηλού κόστους διαδικασία για διαύγαση και υπερδιήθηση ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών που εκφράζουν ζύμη

Η έκφραση ζυμομύκητα εξωγενών γονιδίων μπορεί όχι μόνο να παράγει ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες και πεπτίδια, αντισώματα και εμβόλια, κυτοκίνες, αυξητικούς παράγοντες, ορμόνες και άλλες βιοδραστικές ουσίες, αλλά μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για την παραγωγή βιομηχανικών ενζύμων, λειτουργικών τροφίμων και βιολογικών υλικών, που έχει ευρείες προοπτικές εφαρμογής .

 

Το σύστημα έκφρασης ζυμομύκητα περιλαμβάνει δύο συχνά χρησιμοποιούμενα συστήματα έκφρασης, δηλαδή, σύστημα έκφρασης saccharomyces cerevisiae και σύστημα έκφρασης μεθανοτροφικής ζύμης. Το σύστημα έκφρασης μαγιάς μεθανόλης είναι το πιο ευρέως χρησιμοποιούμενο σύστημα έκφρασης ζυμομύκητα προς το παρόν και το Pichia είναι το πιο συχνά χρησιμοποιούμενο, το οποίο μπορεί να χρησιμοποιήσει μεθανόλη ως άνθρακα και ενέργεια. Επιπλέον, υπάρχουν η μαγιά του Χάνσεν, οι Σφαροίδες κ.ο.κ.

 

Ανεξάρτητα από το είδος του συστήματος έκφρασης ζυμομύκητα, οι κατάντη διαδικασίες διαχωρισμού και καθαρισμού του είναι παρόμοιες και η συγκεκριμένη ροή διεργασίας λαμβάνει ως παράδειγμα την έκφραση ζυμομύκητα ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και πολυπεπτιδικών φαρμάκων.

 

Οι κασέτες με μεμβράνη μικροδιήθησης καθοδήγησης υιοθετούν τη λειτουργία φιλτραρίσματος ανοικτού καναλιού ροής και εφαπτομενικής ροής, που μπορούν να επεξεργαστούν αποτελεσματικά πολύπλοκο υγρό τροφοδοσίας, όπως υγρό ζύμωσης ζύμης και υγρό πυρόλυσης E. coli σε υψηλή ταχύτητα, και μπορεί να εξασφαλίσει γραμμική ενίσχυση από μικρή κλίμακα δοκιμής σε κλίμακα παραγωγής. Ο συμπαγής αρθρωτός σχεδιασμός, η απλή σύνδεση αγωγού, η ανεξαρτησία και η αναγνωσιμότητα του συστήματος μπορούν να προστατεύσουν τους χειριστές και να αποτρέψουν τη βιολογική ρύπανση. Και καμία επαλήθευση συντήρησης και καθαρισμού. Ως εκ τούτου, είναι πολύ κατάλληλο για το βήμα διευκρίνισης της πρώιμης μεταγενέστερης επεξεργασίας.

 

Ο κύριος σκοπός της διαδικασίας UF/DF είναι η αφαίρεση ακαθαρσιών και η εκτόπιση των ρυθμιστικών διαλυμάτων. Η κασέτα μεμβράνης καθοδήγησης υπερδιήθησης έχει καλή ομοιογένεια στο μέγεθος των πόρων της μεμβράνης και ισχυρή υδροφιλικότητα, που μπορεί να δώσει στη μεμβράνη υψηλότερη ροή και χαμηλότερη απορρόφηση πρωτεΐνης και βελτιστοποιημένο σχεδιασμό καναλιού ροής, με μικρότερη πτώση πίεσης, εύκολη μεταφορά υλικού και σημαντικά συντόμευση του χρόνου διήθησης. Επιπλέον, η σειρά προϊόντων είναι πλήρης και ευέλικτη για να καλύψει τις ανάγκες διαφόρων εφαρμογών διαφορετικής κλίμακας. Ως εκ τούτου, είναι πολύ κατάλληλο για το βήμα UF/DF της κατάντη επεξεργασίας.

 

Ακολουθεί η περίπτωση εφαρμογής της μεμβράνης καθοδήγησηςκασέτασε έκφραση ζυμομύκητα ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών.

 

Διευκρίνιση μικροδιήθησης

Χρησιμοποιήσαμε {{0}}.11 τετραγωνικά μέτρα κασέτα μεμβράνης πόρων 0,22μm για να καθαρίσουμε 1,5L υγρού ζύμωσης ζύμης (μοριακό βάρος πρωτεΐνης στόχου 42-55 KD) με μικροδιήθηση. Σε όλη τη διαδικασία της μικροδιήθησης, διερευνήθηκαν ο ρυθμός ανάκτησης της πρωτεΐνης στόχου, η αλλαγή θολότητας και η εξάντληση της ροής της μεμβράνης.

0-17min είναι η διαδικασία συμπύκνωσης, 17-32min είναι η διαδικασία πλύσης και φιλτραρίσματος. Κατά τη διάρκεια ολόκληρης της διαδικασίας μικροδιήθησης, το TMP αυξήθηκε σταδιακά, η ταχύτητα εισόδου του υγρού παρέμεινε αμετάβλητη και η μέση ροή υλικού ήταν 45 LMH.

Η θολότητα του υγρού ήταν 600NTU πριν από τη μικροδιήθηση και 8NTU μετά τη μικροδιήθηση, και η θολότητα άλλαξε προφανώς.

Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η απόδοση της πρωτεΐνης στόχου ήταν > 90%. Η κασέτα μεμβράνης Guidling Technology 0,22μm είναι σταθερή και κατάλληλη για αυτό το σενάριο εφαρμογής.

 

Συγκέντρωση υπερδιήθησης

 

 

Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η πρωτεΐνη στόχος είχε παγιδευτεί πλήρως. Οι κασέτες μεμβράνης Guidling Technology 10kd μπορούν να λειτουργούν σταθερά και είναι κατάλληλες για αυτό το σενάριο εφαρμογής.

Οι περισσότερες από τις ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες που εκφράζονται από ζυμομύκητες δεν εκφράζονται σε μεγάλο βαθμό. Η θολότητα του διηθημένου υγρού μειώθηκε προφανώς και ο ρυθμός ανάκτησης πρωτεΐνης ήταν υψηλότερος. Επειδή ο επόμενος χρωματογραφικός χρόνος είναι πολύ μεγάλος, θα προκαλέσει δυσμενείς επιπτώσεις στην πρωτεΐνη, προκειμένου να μειωθεί ο χρόνος χρωματογραφικής δειγματοληψίας, μπορεί να προστεθεί ένα βήμα συγκέντρωσης υπερδιήθησης και η πρωτεΐνη στόχος μπορεί να συγκεντρωθεί γρήγορα μετά το δείγμα. επιτυγχάνεται ο σκοπός της εξοικονόμησης χρόνου, μείωσης του όγκου πλήρωσης και κατά συνέπεια μείωσης του κόστους παραγωγής.

 

Οι κασέτες μεμβράνης μικροδιήθησης Guidling Technology μπορούν γενικά να μειώσουν τη θολότητα του υγρού τροφοδοσίας σε λιγότερο από 20NTU, καλύπτοντας πλήρως τις ανάγκες της επακόλουθης υπερδιήθησης και χρωματογραφίας. Το ποσοστό ανάκτησης υπερδιήθησης των κασετών μεμβράνης υπερδιήθησης θα ποικίλλει λόγω διαφορετικών υλικών, ο γενικός ρυθμός ανάκτησης μπορεί να φτάσει το 90-95%.

Η Guidling Technology σας καλωσορίζει να ζητήσετε κιτ δοκιμών για σχετική αξιολόγηση.

 

Σχετικά με το Guidling

Η Guidling Technology είναι μια εθνική επιχείρηση υψηλής τεχνολογίας που εστιάζει στα βιοφαρμακευτικά προϊόντα, την κυτταρική καλλιέργεια, τον καθαρισμό και τη συγκέντρωση βιοϊατρικής, τη διάγνωση και τα βιομηχανικά υγρά. Έχουμε αναπτύξει με επιτυχία συσκευές φυγόκεντρου φίλτρου, κασέτες υπερδιήθησης & μικροδιήθησης, φίλτρο ιών, σύστημα TFF, φίλτρο βάθους, κοίλες ίνες κ.λπ. Τα οποία ανταποκρίνονται πλήρως στα σενάρια εφαρμογής βιοφαρμακευτικών προϊόντων, κυτταροκαλλιέργειας κ.λπ. Οι μεμβράνες και τα φίλτρα μεμβράνης μας χρησιμοποιούνται ευρέως στη συμπύκνωση, την εκχύλιση και τον διαχωρισμό της προδιήθησης, της μικροδιήθησης, της υπερδιήθησης και της νανοδιήθησης. Οι πολλές σειρές προϊόντων μας, από μικρού μεγέθους εργαστηριακό φιλτράρισμα μιας χρήσης έως συστήματα φιλτραρίσματος παραγωγής, δοκιμές στειρότητας, ζύμωση, κυτταροκαλλιέργεια και άλλα, καλύπτουν τις ανάγκες δοκιμών και παραγωγής. Η Guidling Technology ανυπομονεί να συνεργαστεί μαζί σας!