Εφαρμογή Υπερδιήθησης στη Διαδικασία Παραγωγής Εμβολίου DTP

Εφαρμογή τουUΗ διήθηση στοPπαραγωγήProcess τουDTP Vακμή

 

1. Εμβόλιο DTP

Ο κοκκύτης, κοινώς γνωστός ως κοκκύτης, είναι μια οξεία λοιμώδης νόσος του αναπνευστικού που προκαλείται από το Bordetella pertussis, που επηρεάζει κυρίως βρέφη και μικρά παιδιά. Μεταδίδεται μέσω των αναπνευστικών σταγονιδίων και έχει περίοδο επώασης από 7 έως 10 ημέρες. Ο ασθενής θα αναπτύξει συμπτώματα συσσώρευσης πτυέλων, συμπεριλαμβανομένου του βήχα. Η διφθερίτιδα είναι μια οξεία λοίμωξη της αναπνευστικής οδού που προκαλείται από το Corynebacterium diphtheriae. Τα βακτήρια εισβάλλουν στον ρινικό βλεννογόνο ή στο λαιμό, πολλαπλασιάζονται, παράγουν εξωτοξίνες και προκαλούν τοπική φλεγμονή και νέκρωση των ιστών. Ο τέτανος, που προκαλείται από το Clostridium tetani, εισέρχεται στο ανθρώπινο σώμα μέσω τραυμάτων του δέρματος ή των βλεννογόνων. Ευδοκιμεί σε αναερόβιες συνθήκες και παράγει τοξίνες, προκαλώντας σπασμωδικές μυϊκές συσπάσεις.

Το εμβόλιο DTP είναι ένα συνδυαστικό εμβόλιο που περιέχει αποτελεσματικά συστατικά Bordetella pertussis, τοξίνης διφθερίτιδας και τοξίνης τετάνου αναμεμιγμένα σε ορισμένες αναλογίες και προσροφημένα σε ένα ανοσοενισχυτικό υδροξειδίου του αργιλίου. Χρησιμοποιείται για την πρόληψη τριών ασθενειών: του κοκκύτη, της διφθερίτιδας και του τετάνου.

 

2. Διαδικασία Παραγωγής Εμβολίου DTP

Το εμβόλιο DTP είναι συνήθως ένα αδρανοποιημένο εμβόλιο. Η παρασκευή του εμβολίου DTP ακολουθεί τη διαδικασία παραγωγής αδρανοποιημένου εμβολίου, κυρίως για λόγους ασφαλείας. Επί του παρόντος, η διαδικασία παραγωγής των εμβολίων DTP στην Κίνα βασίζεται σε μεγάλο βαθμό στην τεχνολογία των δεκαετιών του 1970 και του 1980. Ωστόσο, καθ' όλη τη διάρκεια της διαδικασίας, τα βήματα αιμοκάθαρσης περιλάμβαναν πάρα πολλά συμβατικά στάδια διήθησης, επηρεάζοντας σημαντικά τη συνολική διαδικασία παραγωγής του προϊόντος. Τα προϊόντα διήθησης μεμβράνης εφαπτομενικής ροής με ανοιχτά κανάλια προσφέρουν πλεονεκτήματα στον κατάντη διαχωρισμό βιολογικών προϊόντων, όπως χαμηλές δυνάμεις διάτμησης και υψηλούς ρυθμούς ανάκτησης. Είναι ιδιαίτερα κατάλληλα για τον διαχωρισμό δειγμάτων με υψηλές συγκεντρώσεις, υψηλά ιξώδη και υψηλή περιεκτικότητα σε σωματίδια, καθιστώντας τα κατάλληλα για τη διαδικασία παραγωγής εμβολίων DTP.

3. Εφαρμογή της τεχνολογίας υπερδιήθησης κοίλων ινών στη διαδικασία καθαρισμού του υγρού αντιγόνου συνδυασμένου εμβολίου χωρίς κύτταρα DTP

(1)Υλικά και Μέθοδοι

①Δείγμα

Απολυμασμένο και εξευγενισμένο διάλυμα αντιγόνου DTP χωρίς κύτταρα (εφεξής θα αναφέρεται ως διάλυμα απολυμανθέντος αντιγόνου).

②Κύρια αντιδραστήρια και όργανα

Νερό ποιότητας έγχυσης. χλωριούχο νάτριο (φαρμακευτικής ποιότητας). σάκος αιμοκάθαρσης? Κοίλη ίνα 10kDa. περισταλτική αντλία.

③Υπερδιήθηση και καθαρισμός υγρού αντιγόνου DTP χωρίς κύτταρα

Πρώτα απ 'όλα, συμπυκνώστε το απολυμανθέν διάλυμα αντιγόνου για να 5-διπλώσει περίπου τον αρχικό όγκο χρησιμοποιώντας μια κοίλη ίνα 10 kDa. Στη συνέχεια, ξεκινήστε τη διαδικασία φιλτραρίσματος και πλύσης. Στη συνέχεια, σταματήστε τη διήθηση όταν ο όγκος του διηθήματος φτάσει περίπου 4 έως 5 φορές τον αρχικό όγκο. Τέλος, ξεπλύνετε ολόκληρο το σύστημα και ανακτήστε το διήθημα χρησιμοποιώντας 1-διπλάσιο όγκο φυσιολογικού ορού.

④ Αιμοκάθαρση και Καθαρισμός Υγρού Αντιγόνου DTP χωρίς κύτταρα

Συσκευάστε άσηπτα το απολυμασμένο διάλυμα αντιγόνου σε σάκους αιμοκάθαρσης και βυθίστε το σε στείρο διάλυμα χλωριούχου νατρίου 0,85% και στη συνέχεια πραγματοποιήστε αιμοκάθαρση σε 2-8 βαθμό .

⑤ Αναγνώριση καθαρού υγρού

Αποκαταστήστε αναλογικά τα υγρά δείγματα υπερδιήθησης και αιμοκάθαρσης στον όγκο προ-καθαρισμού. Χρησιμοποιήστε απολυμασμένο διάλυμα αντιγόνου ως μάρτυρα και αναλύστε την καθαρότητα των δειγμάτων χρησιμοποιώντας 12% SDS-PAGE. Μετρήστε το περιεχόμενο στερεών στα διαλύματα και υπολογίστε το ρυθμό ανάκτησης μετά από φυγοκέντρηση των δειγμάτων στις 10,000 rpm για 15 λεπτά.

Αποτελέσματα

①Συγκέντρωση υπερδιήθησης και πλύση κοίλων ινών

Κατά τη διαδικασία συγκέντρωσης υπερδιήθησης, λαμβάνονται 4.800 mL διηθήματος εντός 70 λεπτών, με αποτέλεσμα 5-πλάσια συγκέντρωση. Ο ρυθμός διήθησης μειώνεται σταθερά, με μέσο ρυθμό διήθησης 42 LMH (69,6 mL/min). Κατά τη διαδικασία πλύσης, λαμβάνονται 5.300 mL διηθήματος εντός 90 λεπτών, με αποτέλεσμα 4.{11}}πλύση και ο ρυθμός διήθησης μειώνεται σταθερά, με μέσο ρυθμό διήθησης 36 LMH (59,5 mL/min). Τέλος, ξεπλύνετε ολόκληρο το σύστημα με 1.200 mL φυσιολογικό ορό και αναμείξτε το διάλυμα έκπλυσης με το προηγούμενο διάλυμα πλύσης (1.200 mL). Ο τελικός συντελεστής συγκέντρωσης του υγρού είναι 2.{20}}πλάσιος. Σε σύγκριση με την υπερδιήθηση, η αιμοκάθαρση απαιτεί αλλαγή του διηθήματος πέντε φορές και διαρκεί περίπου 6 ημέρες.

②Αναγνώριση καθαρού υγρού

Η ανάλυση SDS-PAGE αποκάλυψε ότι η καθαρότητα του άνευ κυττάρων υγρού αντιγόνου εμβολίου DTP που καθαρίστηκε τόσο με μεθόδους υπερδιήθησης όσο και με μεθόδους αιμοκάθαρσης παραμένει σχετικά αμετάβλητη, όπως φαίνεται στο παρακάτω σχήμα. Ο ρυθμός ανάκτησης του καθαρισμού με υπερδιήθηση είναι ελαφρώς χαμηλότερος από αυτόν του καθαρισμού αιμοκάθαρσης, όπως φαίνεται στον παρακάτω πίνακα.

Δείγμα	Στερεό περιεχόμενο(%)	Ποσοστό ανάκτησης(%)
Διάλυμα απολυμασμένου αντιγόνου	0.872	/
Υγρό που ανακτάται από υπερδιήθηση (μειωμένο)	0.803	92.1
Υγρό που ανακτάται από την αιμοκάθαρση (μειωμένο)	0.813	93.2

 

συμπέρασμα

Η υπερδιήθηση κοίλων ινών είναι μια τεχνολογία διαχωρισμού μεμβράνης που χρησιμοποιείται ευρέως σε βιομηχανίες όπως τα τρόφιμα, η ζύμωση, τα φαρμακευτικά προϊόντα, η προστασία του περιβάλλοντος και η χημική μηχανική για τον διαχωρισμό, τη συγκέντρωση και τον καθαρισμό μεγάλων μοριακών ουσιών. Σε αυτό το πείραμα, χρησιμοποιήθηκε τεχνολογία υπερδιήθησης κοίλων ινών για τον καθαρισμό του μολυσμένου διαλύματος αντιγόνου DTP χωρίς κύτταρα. Ο πειραματιστής συγκρίθηκε με την παραδοσιακή αιμοκάθαρση όσον αφορά την αποτελεσματικότητα καθαρισμού και το ποσοστό ανάκτησης. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η υπερδιήθηση είχε υψηλότερη αποτελεσματικότητα στην απομάκρυνση αποτοξινωτικών παραγόντων και χρωστικών (που επιτυγχάνεται εντός 3 ωρών, σε σύγκριση με 5-7 ημέρες για την αιμοκάθαρση) και είχε υψηλότερο ποσοστό ανάκτησης. Αυτά υποδηλώνουν ότι η εφαρμογή κοίλης ίνας για καθαρισμό υπερδιήθησης του υγρού αντιγόνου εμβολίου DTP χωρίς κύτταρα είναι εφικτή. Μπορεί να αντικαταστήσει τις υπάρχουσες διαδικασίες αιμοκάθαρσης.